O estudo da macromorfologia das colónias de leveduras em meio sólido é muito importante no âmbito de estudos taxonómicos porque pode permitir orientar ou confirmar um diagnóstico realizado. As características morfológicas estão bastante dependentes do meio e das condições de cultura e além disso podem apresentar grandes variações entre estirpes de uma mesma espécie.
O isolamento de colónias leveduras em meio de sólido permite realizar este tipo de estudo.

Observar as características macromorfológicas, de diferentes espécies de leveduras, em meio sólido.

Material:

. Culturas frescas em meio de manutenção inclinado em tubo com as seguintes espécies de leveduras: Saccharomyces cerevisiae, e Debaryomyces hansenii.
. Placas de Petri com YMA (Yeast Malt Agar/ Levedura Agar Malte)
. Placas de Petri com MYP (Mannitol Yolk Polymyxin/ Polimyxina Gema Manitol)
. Lamparina
. Ansa
. Lâminas
. Lamelas
. Lupa binocular

Procedimento

A – Em dois lotes de placas de Petri colocar dois meios de cultura sólidos: YMA e MYP.

B – Inocular cada um dos lotes de placas de Petri, com Saccharomyces cerevisiae ou com Debaryomyces hansenii, constituindo-se 3 réplicas para cada levedura. Ou seja:

. YMA com Saccharomyces cerevisiae
. YMA com Debaryomyces hansenii
. MYP com Saccharomyces cerevisiae
. MYP com Debaryomyces hansenii

A inoculação deve ser realizada a partir de culturas puras em meio de manutenção inclinado em tubo, com uma ansa esterilizada à chama, utilizando a técnica de cultura em estria para obtenção de placas de isolamento (Fig.1A e B e Fig.2 A e B).



                           1. Placa de isolamento

2. Aspecto de uma placa com colónias de leveduras isoladas

 

Macromorfologia das colónias de leveduras em meio sólido

Utilizando a lupa binocular, observar as características das colónias, em meio sólido, no que diz respeito à sua cor, forma, superfície, brilho, textura, margem e elevação.
A listagem de características que se segue serve de orientação para as observações a efectuar e para a classificação quanto à morfologia das diferentes espécies de leveduras observadas.

Cor – A maioria das colónias de leveduras apresenta cor branca a creme.

AS CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LEVEDURAS EM MEIO LÍQUIDO

Objectivos

Observar as características macro e micromorfológicas de diferentes espécies de leveduras, em meio líquido.

Identificar a ocorrência de reprodução assexuada

Material

.Culturas frescas em meio de manutenção inclinado em tubo com as seguintes espécies de leveduras: Saccharomyces cerevisiae, e Debaryomyces hansenii.
.Lamparina
.Pipetas esterilizadas
.Tubos de ensaio, com Y.E.P.D. com 0,5% (p/v) de glucose, esterilizados
. Lâminas
. Lamelas
. Microscópio
. Álcool
. Papel higiénico

Procedimento para a preparação das culturas das duas espécies de leveduras em meio líquido.

- Preparar uma cultura de cada uma das leveduras em meio de manutenção sólido inclinado em tubo.

- Deixar os tubos à temperatura ambiente durante 48 horas.

- Colocar, com uma ansa, células da levedura, provenientes de cada uma das culturas acima referidas em tubos de ensaio contendo 10 ml de Y.E.P.D. com 0,5% (p/v) de glicose.

- Colocar as culturas à temperatura de 28-30ºC.

- Retirar amostras para a observação da morfologia das células passado 10-12 horas de crescimento.


Macromorfologia em meio líquido

Procedimento

-Observar o anel e a película que se formam à superfície bem como o aspecto do sedimento da cultura de acordo com a classificação que se segue:


ANEL

1. Completo ou não

2. Altura

3. Superfície (lisa ou não)

4. Brilho (brilhante ou baço)

PELÍCULA

1. Extensão (total, ilhas)

2.Superfície (lisa, rugosa, floculenta, irregular, fina)

3. Brilho (brilhante ou baço)



SEDIMENTO

1.Compacto (dissolve-se após agitação)

2.Floculento (formam-se flocos que permanecem)

3.Coerente (dissolve-se facilmente)

4.Mucoide


Micromorfologia em meio líquido

Procedimento

-Retirar, à chama, e com o auxílio de uma pipeta esterilizada uma gota de suspensão de células e montar entre lâmina e lamela.

-Observar ao microscópio e classificar as células de acordo com a sua dimensão, forma e tipo de agrupamento de acordo com a seguinte classificação:

  

  DIMENSÃO

Pequenas, médias ou grandes
Tamanho regular ou não

FORMA
Esférica

Ovóide

Cilíndrica

 
Apiculada

Garrafa

Triângular ou pirâmidal

AGRUPAMENTO

Isoladas
Em cadeia
Em grupo

 

 

Reprodução assexuada
Procedimento

-Retirar, à chama, e com o auxílio de uma pipeta esterilizada uma gota de suspensão de células e montar entre lâmina e lamela.

-Observar ao microscópio e identificar o tipo de reprodução assexuada.