Meios de cultura

Descrição da composição e preparação meios de cultura utilizados nas actividades laboratoriais

MEIO VMN Sulfato

Meio de cultura para crescimento de Desulfovibrio desulfuricans

Composição

REAGENTES

VOLUME (500 ml)

KH2PO4 (Sigma-Aldrich)

0,25 g

NH4Cl (Panreac)

0,5 g

CaCl2.2H2O (Scharlan)

0,02 g

Lactato de sódio DL (Sigma)

3,0 g (2,3075 ml de uma solução a 60% (m/V))

Citrato de sódio (Riedel-de-Häen)

0,15 g

Elixir de Wolfes

0,5 ml

Ácidos casamino-NZCYM Broth (Sigma)

1,0 g

Bacto Triptona (BD)

1,0 g

Na2SO4 (Panreac)

2,25 g

MgSO4.7H2O (Sigma-Aldrich)

0,03 g

FeSO4.7H2O (Sigma-Aldrich)

0,002 g

 

Após pesagem dos diferentes constituintes do meio em balança de precisão, procedeu-se à sua dissolução no volume pretendido de água desionizada, com agitação.
Foi então medido o pH da solução e posteriormente ajustado para um valor compreendido entre 7,45-7,55 com KOH concentrado.
Distribuiu-se o meio preparado por 30 frascos de ensaio, 10 ml em cada um, devidamente etiquetados.
Procedeu-se ao seu desarejamento com Argon durante 10 minutos.
Os frascos foram então devidamente selados com rolhas de borracha e cápsulas de alumínio com 20 mm de diâmetro.
Foram posteriormente esterilizados em autoclave durante 20 minutos a 120ºC e a 1 atmosfera.

MEIO Y.M.A.-Yeast Malt Agar

Meio de cultura para isolamento de leveduras

Composição de “Yeast Malt Agar” (Y. M. A.) [Difco]:

Glucose

1% (p/v)

Extracto de levedura

0,3% (p/v)

Peptona

0,5% (p/v)

Extracto de malte

0,3% (p/v)

Agar

2% (p/v)

Água desionizada

q.b.

 

O meio, previamente liquefeito, foi esterilizado em autoclave durante 20 minutos, a 120ºC e a 1 atmosfera. Em seguida foi vertido em placas esterilizadas e deixado solidificar.

MEIO Y.P.G.

Meio de cultura para manutenção de leveduras

Composição de “Yeast Extract” com Peptona, Glucose e Agar” (Y.P.G.):

Glucose [ Merck ]-

2% (p/v)

Extracto de levedura [ Difco ]

0,5% (p/v)

Peptona [ Difco ]-

1% (p/v)

Agar [ Difco ]

2% (p/v)

Água desionizada

q.b.

 

Liquefez-se inicialmente o meio em autoclave durante 5 minutos a 120ºC. Em seguida distribuiu-se por tubos de ensaio (5 ml/tubo), esterilizando-se os tubos de ensaio com o meio, em autoclave, durante 20 minutos, a 120ºC e a 1 atmosfera. Por fim os tubos foram deixados inclinados a solidificar.


MEIO Y.E.P.D. –Yeast Extract Peptone Dextrose

Meio de cultura para observação da morfologia das células de levedura em meio líquido.

Composição:

Glucose [ Merck ]

2% (p/v)

Extracto de levedura [ Difco ]

0,5% (p/v)

Peptona [ Difco ]

1% (p/v)

Água desionizada

q.b.

 

A solução de glucose, foi esterilizada por filtração (filtros estéreis descartáveis Schleicher & Schuell de poro 0,22 mm) em condições assépticas e a solução restante, foi esterilizada em autoclave (durante 20 minutos, a 120ºC e a 1 atmosfera). Em condições assépticas, a solução de glucose foi adicionada à outra solução e a solução final foi posteriormente distribuída em condições de assépsia, por tubos de ensaio estéreis (6 ml por tubo). O crescimento foi avaliado durante cinco dias.

MEIO M.Y.P.

Meio de cultura para isolamento e identificação de bactérias

Composição de Polimyxina Gema Manitol (Mannitol Yolk Polymyxin):

Extracto de malte

0,7% (w/v)

Extracto de levedura

0,05% (w/v)

Peptona

0,25% (w/v)

Agar

1,5% (w/v)

 

O meio, previamente liquefeito, foi esterilizado em autoclave durante 20 minutos, a 120ºC e a 1 atmosfera. Em seguida foi vertido em placas esterilizadas e deixado solidificar.

MEIO M.Y.P. com cloranfenicol

Meio de cultura que inibe o crescimento de bactérias
Ao meio M.Y.P. liquefeito, adicionaram-se 0,05% (w/v) de cloranfenicol diluídos em 0,5% (v/v) de etanol. O meio foi então esterilizado em autoclave durante 20 minutos, a 120ºC e a 1 atmosfera. Em seguida foi vertido em placas de Petri estéreis e deixado a solidificar.
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